人白细胞介素－3基因翻译起始区的改造提高其在大肠杆菌中的表达水平

为了提高人白细胞介素－3(bhil-3)在大肠杆菌中的表达，在计算机辅助下，设计合成了pcr突变引物，用于改造起始密码aug上下游序列，并在不改变5’端氨基酸编码的前提下，尽可能选用大肠杆菌高频使用的密码子。将经改造后的hil-3cdna和翻译起始区置于pl启动子之下，转入大肠杆菌tapl06，经42℃热诱导后．获得表达产物，提高表达水平近一倍，表达量达到菌体总蛋白量的30％左右。表达产物经westernblot验证，经pvdf膜转移后进行n端顺序分析，证明前15个氨基酸正确，产物经包涵体纯化后，纯度提高至80％以上，初步复性后能明显促进hil－3依赖细胞的生长。