炭疽杆菌噬菌体裂解酶基因在大肠杆菌中的表达及鉴定

利用pcr方法扩增炭疽杆菌噬菌体裂解酶(γlysin)基因,克隆至大肠杆菌表达载体pet22b中,经菌落pcr筛选、序列测定和酶切鉴定证实表达载体pet22b-γlysin构建成功,并在escherichiacolibl21(de3)中获得了高表达。目的蛋白约占菌体总蛋白的40%,5l发酵罐中的产酶水平高达15gl。菌体经超声破碎,制备无细胞抽提液,streamlinesp和sphp柱层析以及sephacryls-100凝胶过滤三步纯化,得到分子量为27kd单一条带的目的蛋白,薄层扫描分析显示其纯度大于95%。目的蛋白的收率为19.1%,纯化倍数为350。生物活性鉴定重组的γ噬菌体裂解酶具有特异性:可快速裂解炭疽杆菌,比活为1400umg左右;而对大肠杆菌、枯草杆菌及蜡样芽孢杆菌没有裂解活性。