intein介导的重组昆虫毒素bmkit在大肠杆菌中的可溶性表达、纯化及活性分析

为获得重组蝎昆虫毒素bmkit，通过pcr方法在bmkit基因的3′端融合了编码6个组氨酸残基的核苷酸序列，将其插入原核表达载体ptwin1的内含肽sspdnabintein基因下游的多克隆位点（mcs）。将获得的表达质粒转化大肠杆菌bl21（de3）中，用iptg诱导融合蛋白表达。用ni-nta亲和层析柱从菌体裂解液中纯化了cbd-intein-bmkithis6融合蛋白，并在柱上诱导intein自剪切，成功去除融合子cbd-intein。通过superdex75凝胶过滤层析获得了纯度达95%以上的bmkithis6蛋白，该蛋白不仅具有正确的二级结构而且有生物活性。