聚乙二醇定点修饰重组人粒细胞集落刺激因子突变体的研究

研究了重组人粒细胞集落刺激因子突变体（rmhg-csf）的聚乙二醇化修饰、分离纯化和活性鉴定。通过对人重组粒细胞集落刺激因子（rhg-csf）第1，3，4，5，17位氨基酸进行突变，并在c末端加了一个半胱氨酸，获得了体外活性为原型rhg-csf150％以上的重组人粒细胞集落刺激因子突变体（rmhg-csf）。然后用分子量为20kd的甲氧聚乙二醇马来酸酐（mpeg-mal）修饰rmhg-csf，反应混合物经离子交换和凝胶过滤柱纯化，得到纯化的聚乙二醇重组人粒细胞集落刺激因子突变体（peg-rmhg-csf）。sds-page电泳分析表明纯化后的peg-rmhg-csf的纯度大于95％，体外活性分析表明peg-rmhg-csf活性优于目前临床使用的聚乙二醇重组人粒细胞集落刺激因子（peg-rhg-csf，neulasta?），药代动力学研究表明peg-rmhg-csf体内半衰期约为14h，比修饰前延长了7倍。