tpo模拟肽与人igg1fc片段的融合表达及其生物学特性研究

依据本室获得的人tpo模拟肽序列，合成了该模拟肽的dna序列，分别连接至4种不同长度的人igg1fc基因片段的5′端，并克隆至质粒表达载体pet28a(+)，转化大肠杆菌bl21(de3)，筛选获得了4种重组工程菌，其中3种分别高效表达了3种不同长度的融合蛋白，而第4种工程菌未表达。表达的3种融合蛋白的分子量分别约为28kd、12kd和12kd，表达量约占菌体蛋白总量的30%左右，纯化获得了3种tpo模拟肽融合蛋白。3种融合蛋白均有较好的体外活性，维持tpo依赖细胞ba/f3-mp1生长的ec50分别为：13、10、10nmol/l。用血小板减少症小鼠动物模型，测定了它们的体内活性，3种融合蛋白均有升高血小板和缩短血小板恢复时间的功能，分别比tpo模拟肽活性提高了18、8、8倍；而对白细胞及红细胞无显著影响。分别用3种融合蛋白免疫balb/c小鼠，均未刺激小鼠产生抗tpo模拟肽抗体，并显示了较好的应用潜力。