地中海拟无枝菌酸菌u-32硝酸还原酶的基因克隆

outhern杂交分析表明在地中海拟无枝菌酸菌u－32染色体dna和黑曲霉niad(硝酸还原酶基因)之间存在着明显的同源性。利用异源niad探针从地中海拟无枝菌酸菌u－32基因文库中筛选得到一个能与niad杂交的5.0kb的pstⅰ片段。该片段经同位素标记后能与地中海拟无枝菌酸菌u－32染色体上一个相同的pstⅰ片段杂交，位于这一片段上的2．1kbsmaⅰ—ecorⅴ片段只能与以硝酸盐为唯一氮源的总rna杂交，而不能与相同条件下以铵盐为唯一氮源的总rna杂交，这些结果表明，所克隆到的5，0kbpstⅰdna片段含有地中海拟无枝菌酸菌u-3z的硝酸还原酶基因。这是好氧细菌硝酸还原酶基因克隆的首次报道。由该酶蛋白分子量推测，其结构基因大小在1．5kb左右，进一步的杂交分析发现在5．0kb的pstl片段中含有完整的nr基因。用20种限制酶对重组质粒pjll进行了限制酶酶谱的构建。发现有10种酶在pjll外源片段上无切点，6种酶为单切点，ecorⅰ与smaⅰ各有两个切点。