昆虫细胞制备aav-itr基因表达微载体

aav-itr基因表达微载体是只含有腺相关病毒(adeno-associatedvirus,aav)倒置末端重复序列(invertedterminalrepeats,itr)、基因表达顺式元件和目的基因，而不含有其他外源dna序列的双链或单链dna。本研究利用杆状病毒表达系统，制备得到两种重组杆状病毒bac-itr-egfp和bac-inrep，并将二者的p3代病毒共同感染昆虫细胞spodopterafrugiperda(sf9)，抽提小分子量dna，获得aav-itr-egfp基因表达微载体，2×107的sf9细胞抽提可以得到100μgaav-itr-egfp基因表达微载体，核酸电泳显示aav-itr-egfp基因表达微载体主要以单体和二聚体的形式存在。将aav-itr-egfp基因表达微载体通过polyethylenimine(pei)转染hek293t细胞，24h后荧光显微镜观察有egfp表达，48h后达到高峰，转化效率达到65%。