人肿瘤坏死因子受体的配体胞外段的原核表达及分析

新近报道糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体的配体(gitrl)具有抑制前体破骨细胞的作用,故命名为osteostat,为深入研究其功能和机制,本研究原核表达人gitrl胞外段并进行活性分析。利用限制性内切酶eco31i获得大肠杆菌偏嗜性gitrl的胞外段cdna序列,构建了基于pqe-30xa的原核表达载体,并在m15[prep4]菌株中经iptg诱导表达带有his融合标签的gitrl重组蛋白,主要以包涵体形式存在。经体外包涵体变性、复性及纯化后,采用sds-page和westernblotting进行分析和鉴定。同时建立了报告基因技术检测gitrl重组蛋白生物活性的方法,简单便捷、灵敏而且周期短,利用此方法分析了重组gitrl胞外段表达蛋白的生物活性。