心肌特异性启动子表达载体的构建及其功能鉴定

本研究构建了心肌特异性a-肌球蛋白重链(a-mhc)启动子表达载体,并对其功能进行了鉴定。以小鼠基因组dna为模板,通过pcr扩增得到a-mhc启动子,插入pgem?-teasy载体,酶切后回收目的片段,置换pcdna3.1(+)-egfp-hygro中的cmv启动子,成功构建出a-mhc-egfp表达载体。对其进行酶切鉴定后,通过电穿孔法转染原代小鼠心肌细胞,转染阳性的心肌细胞出现绿色荧光,而非心肌细胞无荧光出现。a-mhc-egfp表达载体具有心肌特异性表达特性,可用于纯化胚胎干细胞来源的心肌细胞。