h3n2型猪流感病毒m2蛋白表达分析

流感病毒的m2蛋白在流感病毒复制中起着重要作用，是抗流感病毒的靶标分子。本研究以提取的病毒基因组rna作为模板，rt-pcr扩增h3n2亚型猪流感病毒m2基因，分别构建了重组原核表达载体和重组真核表达载体，建立了m2蛋白的原核和真核表达系统。通过大肠杆菌表达系统，制备了m2重组蛋白，并免疫大鼠制备了多克隆抗体。westernblotting和间接免疫荧光方法检测表明所制备的抗体能识别真核表达的m2蛋白和病毒感染细胞后表达m2蛋白，具有良好的特异性。重组m2真核表达载体转染vero细胞，表达的重组m2蛋白大小为20kda，定位于细胞浆中，与病毒感染细胞中的m2蛋白定位相同。westernblotting检测表明m2蛋白在病毒感染细胞12h后才能检出，晚于ns1、np和m1，属于病毒复制的晚期蛋白，可作为病毒复制晚期的指示分子。本研究为弄清m2蛋白在病毒复制过程中的生物学功能奠定了基础。