甲醇浓度对毕赤酵母表达重组人复合α干扰素分离纯化得率的影响

研究了毕赤酵母pichiapastoris表达的重组人复合α干扰素（cifn）时不同诱导甲醇浓度对cifn分离纯化得率的影响，并分析了原因。在5l罐中采用0.25、0.50和0.75％（w/v）三个甲醇浓度诱导时，在0.75％高甲醇浓度诱导下cifn表达水平最高，达到2.06g/l，是0.25％低甲醇浓度诱导的1.24倍，但是低甲醇浓度诱导下cifn分离纯化得率却高于高甲醇诱导浓度下3.75倍。另外，低甲醇浓度下发酵上清液cifn抗病毒活性为2.85×108iu/ml，较高甲醇浓度提高了4.48倍。进一步采用sds-page和native-page免疫印迹分析不同条件下发酵液中cifn存在状态，发现在高甲醇浓度下cifn容易形成大量的聚合体，分别为共价聚合和非共价聚合，而cifn单体含量较少，但是低甲醇浓度诱导下情况完全相反。最终在0.25％甲醇诱导下分离纯化1l发酵上清液可得0.73g单体cifn，是0.75％甲醇诱导下的3.84倍。