灰葡萄孢菌激发子pebc1在毕赤酵母中的分泌表达及其生物活性分析

为了实现激发子pebc1编码基因在毕赤酵母中的分泌表达，采用pcr方法从灰葡萄孢菌bc-4-2-2-1菌株中扩增获得激发子pebc1的编码序列，将其亚克隆至酵母分泌型表达载体ppic9k中，以此片段构建了ppic9k-pebc1重组表达质粒。重组表达质粒经bglⅱ线性化处理，电击转化至毕赤酵母宿主菌gs115，经md、g418-ypd平板和pcr法筛选，获得了重组毕赤酵母菌gs115/ppic9k-pebc1。用甲醇诱导重组酵母菌表达目标蛋白，发酵液经sds-page电泳分析，在约39kda处出现特异目标条带。westernblotting检测结果说明，重组表达产物具有良好的抗原性。生物活性检测表明，酵母重组表达蛋白pebc1能够诱导拟南芥和黄瓜幼苗对灰霉病的抗性。