溶葡球菌酶的定点突变与peg巯基定点修饰

为了建立聚乙二醇(peg)巯基定点修饰溶葡球菌酶的方法，并检验假定连接区的突变与修饰对酶活的影响，对溶葡球菌酶的假定连接区进行了巯基聚乙二醇定点修饰研究。通过分析溶葡球菌酶的结构特征，选择两个结构域之间的氨基酸(133-154aa)进行定点突变引入半胱氨酸残基。使用单甲氧基聚乙二醇马来酰亚胺(mpeg-mal)进行定点修饰，对修饰后的酶进行纯化并测定酶活性。结果表明定点突变的半胱氨酸残基peg修饰效率高、产物单一，运用简便的ni2+-nta柱亲和层析法实现了一步分离，获得了高纯度的目标蛋白，但在连接区进行定点突变及peg定点修饰后的酶活有不同程度的降低，表明假定连接区部分位点的peg修饰会对溶葡球菌酶的催化活性产生一定影响。