用构建的新型bmnpv载体在家蚕高效表达人β-干扰素

构建了家蚕核多角体病毒(bombyxmorinuclearpolyhedrosisvirus，bmnpv)新型载体pbm92，该载体将多角体蛋白基因的起始密码atg改变为att，然后在多角体蛋白基因的+12位后连接有5个外源基因的克隆位点。将hulfn-β基因克隆在多角体蛋白基因的+12位后，构建了pbmifn+12；同时构建了huifn－β克隆在－3位后的转移载体pb．mifn－3。将两种转移载体dna分别与bmnpv基因组dna共转染bm—n细胞。利用重组病毒不产生多角体蛋白的特征，筛选重组病毒。用huifn－β基因探针与重组病毒dna进行杂交鉴定。重组病毒bmifn+12感染bm-n细胞，其上清ifn活性为2．0×106iu／ml，将bmifn+12注射5龄家蚕虫体，表达水平为5．o×107iu／ml，是hulfn-β基因克隆在多角体蛋白基因的-3位后获得的重组病毒表达量的2—4倍。构建的新型bmnpv载体能够在家蚕高效地表达huifn-β。家蚕虫体生产的rhulfn-β蛋白具有天然huifn-β的抗原性。