蛋白酪氨酸磷酸酶ptp1b催化活性区的原核表达及活性分析

从genbank获得人ptp1b催化活性区(ptp1bc)氨基酸序列(1~301aa),通过重叠pcr获得ptp1bc基因。构建pet-22b(+)/ptp1bc原核表达载体,转化大肠杆菌bl21(de3),阳性重组子iptg诱导表达,ni柱纯化蛋白。目的蛋白以包涵体的形式表达,表达量占菌体总蛋白30%以上。纯化后,蛋白纯度达95%以上。westernblotting结果表明所得的蛋白可与抗ptp1b抗体发生特异性结合;酶活实验证实复性的蛋白具有一定的磷酸酶活性。ptp1bc基因的构建、表达纯化及活性分析,为进一步的功能研究奠定了基础。