tail-pcr的改良及其在分离小麦基因启动子中的应用

在经典tail-pcr(thermalasymmetricinterlacedpcr)的基础上,对其进行了如下四处改进:用10个碱基的rapd引物代替16个碱基的随机兼并引物作为pcr中的随机引物;将较低特异性循环的复性温度由44°c降至29°c;增加5个高特异性反应循环,减少5个较低特异性反应循环;用单引物对第三轮pcr产物进行初步鉴定。利用改进的tail-pcr方法分离了小麦x基因的5′未知的侧翼序列,与gus基因融合后转入拟南芥,通过组织化学检测分析表明分离到的5′侧翼序列具有启动子功能,同时说明改进的tail-pcr能更好地应用到较复杂基因启动子的分离。