以潮霉素b抗性为选择标记的深黄被孢霉原生质体转化

利用亚硝基胍（mnng）诱变方法筛选了一株深黄被孢霉潮霉素b敏感型菌株m6-22-4。采用peg介导的方法，将含有e.coli潮霉素b抗性标记的pd4质粒转入敏感株m6-22-4原生质体，并在潮霉素b浓度为400μg/ml的选择培养基上筛选转化子，获得了1.6～2.8个转化子/μg质粒dna的转化频率。稳定性实验表明，质粒线性化后所获得的转化子在pda培养基上传代10代以后，转接到选择平板上有31.6%仍具有hmb抗性；随机挑选了3个转化子，通过pcr方法检测到潮霉素抗性基因的存在，southern杂交发现，潮霉素抗性基因已经以1～2拷贝数整合到深黄被孢霉m6-22-4染色体上，这是深黄被孢霉转化系统的首次报道。