两种udp-葡萄糖脱氢酶对透明质酸生物转化的影响

分别从大肠杆菌和化脓链球菌中扩增出编码udp-葡萄糖脱氢酶基因ecohasb和spyhasb，并将其插入t7表达载体prx2构建重组质粒prxeb和prxsb。在大肠杆菌bl21(de3)中重组表达，并对经镍柱纯化后的udp-葡萄糖脱氢酶的酶学性质进行分析。酶学性质研究表明：spyhasb的最适反应温度是30℃，最适ph10，最适条件下的比活力是12.2u/mg；ecohasb的最适反应温度是30℃，最适ph9，最适条件下的比活力是5.55u/mg。从多杀巴氏杆菌扩增出的透明质酸合成酶基因pmuhasa分别与ecohasb和spyhasb构建共表达载体pbpaeb和pbpasb。将其转化到大肠杆菌bw25113中，经生物转化生产透明质酸(ha)，并对转化条件进行了优化。结果表明：重组菌株进行透明质酸转化时，udp-葡萄糖脱氢酶酶活力越高，稳定性越好，ha产量越高；转化条件优化后，pbpaeb/bw25113和pbpasb/bw25113在摇瓶中的产量分别是1.52和1.70g/l,比之前报道的提高了2?3倍。