小鼠饲养过程中蛋白质组的整体重稳定性同位素标记

文中探讨了稳定同位素代谢标记(silac)定量技术在哺乳动物模型上的应用，建立了可用于疾病模型比较蛋白质组学研究的定量内标。用含1%13c6-lysine的silac鼠粮饲养c57bl/6雌性小鼠，记为f0代，通过与雄性小鼠交配繁殖出f1代，相同方法繁殖出f2代标记小鼠。分离f2代小鼠的大脑、肺脏、心脏、胃、小肠、肝脏、脾脏、肾脏和肌肉组织，提取各组织的全蛋白，进行蛋白酶lys-c酶切，利用高效液相色谱串联质谱联用技术(lc-ms/ms)进行鉴定和定量分析。对蛋白质定量结果进行高斯拟合确定均值及标准差，得出不同脏器和小鼠整体的标记效率，肝脏的标记效率最高，为96.34%±0.90%；大脑标记效率最低，为92.62%±1.98%，小鼠整体标记效率为95.80%±0.64%，符合silac标记效率不低于95%的国际标准。成功地将silac方法从微生物和细胞系水平拓展到哺乳动物模型，这为基于动物模型研究疾病发生、发展机制提供了有力工具。