小鼠t-bet逆转录病毒载体的构建与功能验证

为在小鼠细胞中表达并研究t-bet功能，首先构建了含有报告基因thy1.1的小鼠t-bet逆转录病毒载体，并将构建的载体质粒转染病毒包装细胞系包装成重组病毒，再利用重组病毒分别感染nih-3t3和d9细胞系检测其感染能力。之后，使用该重组病毒感染t-bet敲除小鼠的cd4+t淋巴细胞，流式细胞术检测t-bet及其下游靶基因ifng的表达情况。经验证，重组的逆转录病毒感染t-bet敲除小鼠t淋巴细胞后可以在细胞中表达t-bet，并进一步引起下游靶基因ifng的表达上调，证明本研究中外源表达的转录因子t-bet具有正常功能。综上所述，本实验成功构建了含有报告基因的小鼠t-bet重组逆转录病毒载体，为进一步在小鼠细胞中研究t-bet功能奠定了基础。