甲醇酵母表达系统高拷贝数整合型表达载体的构建

以甲醇酵母(hansenulapolymorpha)表达系统的yip型表达载体pjf5-1为基础，通过引入宿主来源的一个rdna随机顺序和由sv40早期启动子控制的g418抗性基因(neo)及对野生型标记基因hpleu2启动子大部分上游序列的缺失，构建了一个高拷贝整合型表达载体pmirh。有关转化、筛选和拷贝分析等试验结果表明，由pmirh可产生含高拷贝数载体的转化子，并可通过由leu2+筛选和g418抗性筛选所组成的二级筛选方法富集这些含高拷贝数载体的转化子。有关完整dna和消化dnasouthern杂交分析结果进一步表明，上述高拷贝数的载体以串联重复排列的方式整合于宿主基因组。