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生物工程学报 2001
抗a型产气荚膜梭菌α毒素单链抗体基因的克隆和表达Keywords: a型产气荚膜梭菌,α毒素,单链抗体,基因克隆,基因表达,中和效应 Abstract: 应用rtpcr技术,从分泌具有中和活性的抗a型产气荚膜梭菌α毒素单克隆抗体的杂交瘤细胞中,扩增出抗体vh和vl基因,连接成scfv基因,并将其克隆至pgemt载体中构建了重组质粒pxscfv2e3。经序列分析证实,vh和vl基因及linker基因拼接正确,基因全长为726bp,编码242个氨基酸。随后将其定向克隆于表达载体phog21,转化至大肠杆菌xl1blue筛选出表达菌株xl1blue(phog2e3)。经elisa和sdspage分析表明,在20℃用iptg诱导培养时,表达的scfv蛋白占菌体总蛋白的25%。并且scfv基因表达产物能够中和α毒素的磷酯酶c活性
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