重叠延伸pcr法克隆人脂联素基因及其在毕赤酵母中表达

利用重叠延伸pcr法克隆出人脂联素基因,连接至克隆载体pgem-t中,转化大肠杆菌dh5a,通过测序对其进行序列分析后,进一步构建毕赤酵母表达载体ppic3.5k-adpn,通过电击法转化毕赤酵母gs115,转化的重组酵母菌用甲醇诱导外源基因表达。经pcr、southernblotting鉴定,获得了重组毕赤酵母菌株;经甲醇诱导人脂联素基因表达,westernblotting杂交鉴定证明人脂联素基因已经在毕赤酵母中成功表达。结果表明重叠延伸pcr法准确方便克隆出人脂联素基因,在30oc,1%甲醇诱导48h,人脂联素基因在巴斯德毕赤酵母中的表达最佳。