人巨细胞病毒m抗原表位保守氨基酸突变的分析

为确定人巨细胞病毒m抗原表位mad的关键氨基酸残基,以mad多肽序列为基础,分别将保守氨基酸残基单一突变为甘氨酸残基,构建各自突变体,然后与人源fc的n端融合,通过原核表达载体pet32-fc表达融合蛋白mad-fc,经proteina柱亲和纯化得到各突变体纯品。通过elisa及westernblotting方法验证各突变体特异结合羊抗hcmv多抗间的差异,从而确定表位关键氨基酸残基。结果显示,将mad中的谷氨酰胺残基单突变为甘氨酸残基后,madq-g结合羊抗hcmv多抗活性大大降低,差异显著;而其他氨基酸残基单突变时,对mad活性影响程度很小。由此得出结论:mad结合羊抗hcmv多抗的活性与谷氨酰胺残基有关。