基因工程α-半乳糖苷酶的制备及其性质研究

在获得可分泌表达α-半乳糖苷酶基因工程毕赤酵母菌株的基础上，尝试了基因工程α-半乳糖苷酶在5l发酵罐中的表达以及从发酵液中纯化α-半乳糖苷酶的研究。在4l无机盐培养基中接种0.4lppic9k-gal/gs115培养物，最终得到3.5l发酵液。离心所得上清中总蛋白含量为2.1g/l。根据发酵液中目的蛋白含量高、杂质少等特点，设计了如下的纯化流程：离心→超滤→阳离子交换层析→脱盐→浓缩。纯化后电泳银染结果呈单一蛋白带，总回收率41%。通过测定米氏常数等生化性质对重组酶进行鉴定后，完成了人b型红细胞的酶解实验。结果表明，从发酵液中纯化的α-半乳糖苷酶可将b型红细胞改造成o型红细胞。本研究同时在数量和质量上为α-半乳糖苷酶在众多领域的广泛应用奠定了基础。