pras40与14-3-3蛋白各亚型相互作用的酵母双杂交系统检测

pras40是近几年新发现的akt作用底物，14-3-3结合蛋白。为确定pras40与14-3-3蛋白7种亚基间相互作用关系，利用gateway方法构建用于酵母双杂交系统的诱饵质粒peg-pras40及转录激活质粒pjg-pras40，将pras40和14-3-3各亚型质粒分别作为诱饵蛋白质粒及转录激活质粒共转化酵母细胞egy48，通过氨基酸营养缺陷生长实验及β-半乳糖苷酶显色反应分析两种蛋白相互作用程度。酶切鉴定证实成功地构建了peg-pras40和pjg-pras40质粒，酵母双杂交实验结果显示pras40可以和14-3-3亚型tau,beta,zeta及epsilon相结合，epsilon较强，beta和zeta次之，tau较弱。此结果将为深入研究pras40与14-3-3蛋白生物学功能及发现药物靶标奠定基础。