重组鲁西黄牛α干扰素融合蛋白的表达及其抗病毒活性研究

通过pcr从鲁西黄牛(yellowcattle)基因组dna中克隆了α干扰素(boifn-α)基因，并插入到pet32a+中,构建成重组原核表达质粒pet32a+/boifn-α，进行测序和诱导表达。测序结果表明，鲁西黄牛ifn-α基因全长498个核苷酸,含一个开放阅读框(orf),编码166个氨基酸的成熟蛋白，与已报道的牛α干扰素c亚型氨基酸组成同源性为97.6%。表达产物经sds-page分析，表达出40kd的融合蛋白，表达量占菌体总蛋白的26.7%。表达产物经镍离子螯合次氨基三乙酸(ni-nta)亲和层析纯化，纯化产物进行复性后在mdbk/vsv上的活性为5×105u/mg。重组牛ifn-α（rboifn-α）对牛轮状病毒(brv)有一定的抑制作用,抗brv病毒活性为1.5×105u/mg。结果显示从鲁西黄牛中克隆了ifn-α基因的一种新亚型,即boifn-αc2，并实现了高效表达，获得了具有较高抗病毒活性的重组干扰素产物，为重组牛干扰素的开发奠定了基础。