牛asia1型口蹄疫病毒感染性克隆的构建

本研究在完成asia1型口蹄疫病毒(fmdv)as01株全基因组测序的基础上,采用融合pcr扩增得到含有15个c碱基的5￠端片段(约1800bp),并利用长片段pcr扩增得到基因组3￠端片段(约6700bp)。再利用单一的酶切位点将2个片段克隆到pbluescriptsk载体中,从而获得携带as01株基因组全长cdna的重组质粒pbsas。将该质粒线性化后作为模板体外转录并转染bhk-21细胞,可观察到典型的细胞病变。对收获的病毒采用rt-pcr、间接免疫荧光和电镜观察等检测及鉴定,结果表明,拯救出了具有感染性的asia1型fmdv。拯救毒与亲本毒对乳鼠的致病力(ld50)差异不显著,具有相似的生物学特征。该感染性克隆的构建,为深入研究fmdv的致病机理及开发新型疫苗提供了有效的反向遗传操作平台。