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生物工程学报 2002
葡萄糖异构酶突变体酶gig138p和gig138p-g247d在变铅青链霉菌中的高效表达及检测Keywords: 葡萄糖异构酶,突变体酶,穿梭载体,变铅青链霉菌,高效表达 Abstract: 将含有g138p单点突变和g138p-g247d双点突变的gi结构基因，分别克隆入e.coli链霉菌穿梭载体phz1272，成功构建了穿梭表达载体phzgi1和phzgi2。通过原生质体的转化，将穿梭表达载体导入变铅青链霉菌tk54菌株。30℃振荡培养24h，加入2μg/ml硫链丝菌素诱导表达12h。sdspage电泳表明，两个穿梭载体在tk54菌株内表达出425kd特异性条带。薄层扫描显示，突变体酶gig138p和gig138pg247d分别约占可溶性蛋白的19%和22%。western杂交进一步证实gig138p和gig138pg247d在变铅青链霉菌tk54中获得了表达。
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