阿魏酸酯酶a的基因克隆与表达及其水解产物的纯化

为在毕赤酵母中表达来源于米曲霉aspergillusoryzae的a型阿魏酸酯酶并研究其水解功能，探讨大孔树脂对其水解产物阿魏酸的纯化条件及纯化效果，以米曲霉a.oryzaecicc40186总rna为模板，通过rt-pcr技术克隆出了米曲霉阿魏酸酯酶a(aorfaea)成熟肽的编码基因aorfaea，并借助ppic9k质粒实现了其在毕赤酵母gs115中的异源表达。sds-page分析结果显示纯化后的重组阿魏酸酯酶(reaorfaea)为单一条带，其表观分子质量约39.0kda。以阿魏酸甲酯为底物，经高效液相色谱法测得该酶的最高酶活为58.35u/mg。利用reaorfaea和木聚糖酶复合酶水解去淀粉麦麸制备阿魏酸，用大孔树脂纯化小麦麸皮阿魏酸粗提液，所测树脂中hpd-300型大孔树脂的吸附量和解吸率较高，以50%的乙醇为洗脱液，当流速为1.0ml/min时洗脱效果较好。在该纯化条件下，阿魏酸的回收率为92%，质量分数由原材料中的0.13％富集提高到10.55%。这些研究为阿魏酸的酶法“绿色生产”及应用奠定了坚实的理论基础。