%0 Journal Article
%T 阿魏酸酯酶a的基因克隆与表达及其水解产物的纯化
%A 曾妍？
%A 龚燕燕？
%A 邬敏辰？
%A 殷欣？
%A 唐存多？
%J 生物工程学报
%P 425-434
%D 2014
%R 10.13345/j.cjb.130377
%X 为在毕赤酵母中表达来源于米曲霉aspergillusoryzae的a型阿魏酸酯酶并研究其水解功能，探讨大孔树脂对其水解产物阿魏酸的纯化条件及纯化效果，以米曲霉a.oryzaecicc40186总rna为模板，通过rt-pcr技术克隆出了米曲霉阿魏酸酯酶a(aorfaea)成熟肽的编码基因aorfaea，并借助ppic9k质粒实现了其在毕赤酵母gs115中的异源表达。sds-page分析结果显示纯化后的重组阿魏酸酯酶(reaorfaea)为单一条带，其表观分子质量约39.0kda。以阿魏酸甲酯为底物，经高效液相色谱法测得该酶的最高酶活为58.35u/mg。利用reaorfaea和木聚糖酶复合酶水解去淀粉麦麸制备阿魏酸，用大孔树脂纯化小麦麸皮阿魏酸粗提液，所测树脂中hpd-300型大孔树脂的吸附量和解吸率较高，以50%的乙醇为洗脱液，当流速为1.0ml/min时洗脱效果较好。在该纯化条件下，阿魏酸的回收率为92%，质量分数由原材料中的0.13％富集提高到10.55%。这些研究为阿魏酸的酶法“绿色生产”及应用奠定了坚实的理论基础。
%K 米曲霉
%K 阿魏酸酯酶a
%K 克隆表达
%K 阿魏酸
%K 纯化
%U http://journals.im.ac.cn/cjbcn/ch/reader/view_abstract.aspx?file_no=gc14030425&flag=1