水母雪莲黄酮合成酶fnsii基因克隆及其在3种细胞系中的表达

水母雪莲是中国传统珍稀药材，其主要活性成分之一木犀草素具有预防和治疗癌症的功效。以水母雪莲绿色细胞系为试材，采用rt-pcr和race-pcr方法获得1个水母雪莲fnsii基因cdna全长，命名为smfnsii(genbank登录号为kf170286)。序列分析结果表明：smfnsii全长1710bp，包含34bp的5?非编码区、125bp的3?非编码区和1个长度为1551bp编码516个氨基酸的开放阅读框。氨基酸序列分析表明smfnsii属于细胞色素p450cyp93b亚家族单氧化酶。序列比对和系统进化分析表明，smfnsii氨基酸序列与同科植物毛山柳菊的亲缘关系最近，相似性达87%以上。实时荧光定量pcr分析表明，smfnsii在白色、绿色和红色细胞系均有表达，红色系中的表达量最高，白色系中表达量最低，此结果与高效液相色谱分析3种颜色细胞系中木犀草素含量结果一致。构建pet-smfnsii原核表达重组质粒，并在大肠杆菌中诱导表达，诱导蛋白大小与预期一致。通过筛选fnsii基因表达水平高、高产木犀草素的水母雪莲细胞系和植株，可培育抗炎抗癌活性较高、具有高保健功能的雪莲生药新品种。