共表达分子伴侣pdi和ero1对灰盖鬼伞过氧化物酶在毕赤酵母中表达的影响

来源于灰盖鬼伞长度为1092bp的cip目的基因与aox1启动子一起整合进酵母染色体基因组中。重组蛋白cip在酿酒酵母信号肽的引导下成功分泌到胞外，质谱鉴定为目的蛋白，成功在毕赤酵母中表达灰盖鬼伞过氧化物酶(cip)。将伴侣蛋白内质网氧化还原酶1(ero1)、二硫键异构酶(pdi)分别单独及同时转入cip酵母受体菌中，研究它们对cip在毕赤酵母中表达的影响。结果表明：在摇瓶中，相对于无分子伴侣的菌株，单独整合pdi及同时整合ero1、pdi菌株的cip酶活分别提高了2.43和2.62倍，活力达到316u/ml和340u/ml。挑选同时整合ero1、pdi伴侣蛋白的cip菌株，5l发酵罐进行高密度发酵，酶活最高达到3379u/ml，比摇瓶提高约10倍。本实验结果较目前已报道的1200u/ml已是最高水平。