小麦种子过氧化物酶wp1基因的原核表达、纯化及多克隆抗体制备

wp1是小麦种子中最主要的阳离子过氧化物酶，该酶不仅参与种子的发育过程，而且影响面粉的加工品质。首先构建了wp1基因原核表达载体pet28a-wp1，并将其转化到t7expression大肠杆菌菌株中诱导表达。his-tag融合的wp1主要以包涵体形式存在，使用ni-nta亲和层析柱在变性条件下进行纯化，获得纯度大于98％的重组蛋白。重组wp1经尿素梯度透析复性溶解后免疫新西兰大白兔，最终获得wp1多克隆抗体。elisa分析结果显示制备的wp1兔抗血清的效价大于1∶625000；westernblotting结果证明制备的多克隆抗体对wp1具有很好的专一性。