拟南芥硫酯酶基因在毕赤酵母中的表达

硫酯酶在生物体内能催化水解脂酰酰基载体蛋白和饱和脂肪脂酰链，对中链脂肪酸(mediumchainfattyacids，mcfas)的积累起着关键作用。为获得具有生产中链脂肪酸能力的工程菌，以拟南芥cdna为模板，pcr扩增得到其脂酰-acp硫酯酶基因atfata，经ecorⅰ/xbaⅰ双酶切后连接至同样双酶切的质粒中，获得重组质粒ppiczαa-atfat。将重组质粒电击转入毕赤酵母gs115中，通过zeocin抗性筛选，挑选出阳性克隆子并摇瓶发酵诱导，sds-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析获得明显目的蛋白条带，首次成功构建atfata的真菌表达系统。气质联用法检测发酵产物胞外游离脂肪酸，发现毕赤酵母atfata重组菌株比起始gs115菌株胞外游离mcfas(主要是辛酸)产量增加51%，mcfas产量占胞外总脂肪酸产量的28.7%，而野生菌中这一比例仅有18.1%，这为日后生产安全无毒害的mcfas探索了一条新的途径。