里氏木霉内切-β-甘露聚糖酶基因在毕赤酵母中的表达

采用pcr方法从里氏木霉(trichodermareesei)基因组中获得含有两个内含子的内切-β-甘露聚糖酶全长基因，末端重叠延伸pcr去除内含子后，将其插入到巴斯德毕赤酵母(picherpastoris)表达载体ppic9k中，位于α-因子信号肽序列的下游，并与之同框，获得重组质粒pm242。重组质粒线性化后用电击法转化毕赤酵母菌株gs115。经大量筛选，获得高效分泌表达内切甘露聚糖酶的毕赤酵母工程菌株gpmf25。摇瓶发酵结果表明，培养基中甘露聚糖酶的活力可达12.5iu/ml。重组酶最适ph和最适反应温度分别为5.0和80℃，在ph5.0～6.0时酶活稳定，在ph5.4时70℃保温30min酶活维持50％以上。