抗松材线虫纤维素酶单链抗体库的构建及筛选

构建鼠源性松材线虫纤维素酶（bursaphelenchusxylophiluscellulase,bxc）的噬菌体单链抗体库，从中筛选特异性bxc的单链抗体。以bxc为抗原免疫balb/c小鼠，从脾脏提取总rna，用rt-pcr技术扩增小鼠抗体重链（vh）和轻链(vl)可变区基因。经重叠pcr(soe-pcr)在体外将vh和vl连接成单链抗体(scfv)基因，并克隆到噬菌粒载体pcantab5e中，电转化至大肠杆菌tg1，经辅助噬菌体超感染，成功构建了库容为5×104的anti-bxc单链抗体库，并从该抗体库中初步筛选到了特异性识别bxc的噬菌体单链抗体scfv。将表面展示单链抗体的单克隆噬菌体转化大肠杆菌hb2151进行可溶性表达，sds-page及westernblot分析结果显示，可溶性scfv获得表达，且与bxc具有结合活性，为松材线虫的检验检疫以及病理学研究奠定了基础。