蚯蚓纤溶酶新基因efp-0的电子克隆及其编码区序列rt-pcr验证

利用生物信息学手段，以期获得蚯蚓纤溶酶f-ⅰ-0组分的基因。根据从粉正蚓（lumbricusrubellus）中分离的fⅰ0组分的n端氨基酸序列vvggsdttigqyphql，利用dnaman软件通过电子克隆方法，从lumbricidae的dbest中获得该组分的核酸序列信息，设计特异引物，经过rt-pcr，成功地从赤子爱胜蚓（eiseniafoetida）中克隆到一条蚯蚓纤溶酶新基因，命名为efp-0。efp-0基因全长678bp,编码225个氨基酸的成熟肽，属丝氨酸蛋白酶，胰蛋白酶家族，与f-ⅰ-0组分的氨基酸组成非常接近。blast证明，efp-0与已报道的蚯蚓纤溶酶基因之间的相似性均低于40％，因此为蚯蚓纤溶酶中的一个新基因，genbank登录号为dq836917。构建的pmal-c2x-efp-0重组质粒，在大肠杆菌tb1中获得融合蛋白mbp-efp-0的可溶性表达，表达产物有酪蛋白平板溶解活性。