串联表达prrsvm与gp5蛋白重组腺病毒的构建及其免疫特性研究

利用pcr扩增出猪繁殖与呼吸综合征病毒的m基因，按正确的读码框与gp5基因串联，成功构建穿梭载体pshuttle-cmv-m-gp5，经pcr、测序鉴定正确。pmeⅰ线性化后在bj5183大肠杆菌内与腺病毒骨架载体padeasy-1同源重组，产生重组腺病毒dna。重组腺病毒dna经pacⅰ线性化后用脂质体转染hek-293a细胞，在细胞内包装成完整的腺病毒，通过ifa可以检测到m与gp5串联的重组腺病毒构建成功，可以正确地表达目的蛋白。将构建好的重组腺病毒免疫小鼠，结果表明可以诱导产生较强的体液免疫应答（elisa抗体和中和抗体）和细胞免疫应答（淋巴细胞增殖和ctl反应）。证明该重组腺病毒具有较好的免疫原性，为下一步猪体免疫试验奠定了基础。