人蛋白质二硫键异构酶cdna基因的克隆及在大肠杆菌中的表达

从人胚胎肝组织中分离纯化出总rna，在总rna中提取mrna，经逆转录得到cdna第一条链，并以之为模板和相应寡聚脱氧核苷酸为引物．进行pcr合成人蛋白质二硫键异构酶(proteimdisulfideisomerase，pdi)cdna基因，将所得cdna克隆到质粒pucl8上，转化大肠杆菌dh5a细胞，进行诱导表达筛选和活性筛选。将筛选的基因克隆到载体pbv220上，在大肠杆菌细胞中表达，产物以溶解形式在胞浆中表达。表达产物经硫酸铵分级沉淀和deaesepharosefastflow柱层析分离，产物的纯度与活性分别为90％、1100u／g。