三角酵母d-氨基酸氧化酶基因的克隆、测序及表达*

利用跨越内含子的pcr技术，三角酵母(trigonopsosvariabilis)变种fa1-10中扩增得到d-氨基酸氧化酶基因(daao)，并通过ta克隆的方法将其克隆至pgem—t载体。序列测定结果表明，所得daao基因的5’端内含子已被删除，基因总长度为1071bp，它与trigonopsisvariabilisd-氨基酸氧化酶同源性达98.3％，与fusariumsolanii和rhodotoru-lagracilis的同源性分别是38.9％和30.8％。为提高表达水平，又将此基因转移至高表达载体pet-28b上．在大肠杆菌bl-2l(de3)中进行诱导表达。经iptg诱导，目的蛋白的产生量可占菌体总蛋白量的46％，分子量约为38kd。d-氨基酸氧化酶的活力可达802u／l。