植酸酶phya基因在解脂耶氏酵母po1h中的表达

本实验通过pcr方法从毕赤酵母gs115-phya中扩增出不含有信号肽及内含子的黑曲霉nrrl3135植酸酶phya基因，并将其克隆到表达载体pina1297中，得到表达载体pina1297-phya，利用醋酸锂转化法将线性化载体转化到解脂耶氏酵母po1h中，通过ynbcasa和ppb平板筛选出阳性表达菌株，阳性菌株在ym培养基中28℃培养6d后酶活达到最大为636.23u/ml。表达上清经sds-page分析得到表达植酸酶分子量约为130kda，但通过去糖基化处理后其分子量变为51kda，与理论值相符。经过酶学性质分析表明重组植酸酶最适ph为5.5，最适温度为55℃，该酶在ph2.0~8.0处理1h后仍有较高酶活，并且90℃处理10min后还有86.08％的残留酶活，其抵抗胃蛋白酶和胰蛋白酶能力也较强。