噬菌体展示hiv-1tat38-61碱性区51和55位随机突变体文库的构建

为了构建噬菌体展示tat38-61(51n/55n)碱性区突变体文库，进一步研究hiv-1tat38-61表位的分子进化筛选，采用含随机核苷酸序列的引物，通过overlappcr的方法获得51和55位氨基酸随机突变的全长tat编码序列，再以此为模板pcr扩增出两端含有xbai识别序列的tat38-61突变体片段hiv-1tat38-61(51n/55n)，克隆至噬菌体展示载体pcantab5s上，转化大肠杆菌tg1，经m13k07辅助噬菌体拯救，构建噬菌体展示tat38-61(51n/55n)碱性区突变体文库。结果显示文库的库容量为5.0×106，滴度为2.65×1012tu/ml，阳性克隆率为56.50％；序列分析显示文库中51、55位核苷酸与氨基酸均呈随机性分布，达到了对文库进行分子进化筛选的要求，为获得可用作疫苗候选物的新型tat突变体奠定基础。