石斑鱼性反转相关基因ecam的克隆及表达特征分析

用甲睾酮片饲喂2～4龄赤点石斑鱼(epinephelusakaara)，6周后90%以上的雌鱼性逆转为功能性雄鱼.运用抑制性差减杂交技术(ssh)，结合smartcdna合成和race-pcr方法，从性反转雄鱼性腺中克隆到钙调蛋白基因(ecam).该基因cdna全长为582bp，开放阅读框长450bp，编码的蛋白质由149个氨基酸组成，5′端非编码区74bp，3′端非编码区58bp.虚拟rna印迹表明，ecam在性反转雄鱼性腺中表达，而在正常雌鱼性腺中表达微弱.各种组织的半定量rt-pcr显示，ecam在脑、心、肝、脾、肾都有转录，在精巢和下丘脑中表达水平较高，而在肌肉中表达甚弱.性反转不同时期性腺的半定量rt-pcr及蛋白质印迹表明，性逆转过程中性腺里ecam的表达量逐渐增加.上述结果提示钙调蛋白可能在赤点石斑鱼性逆转过程中发挥着作用，ecam可能是促使石斑鱼由雌向雄转变的重要功能基因之一.