小鼠肌肉生长抑制素基因短发夹rna促进myod在c2c12细胞中的表达

肌肉生长抑制素(myostatin，mstn)属于转化生长因子-β(transforminggrowthfactor-β，tgf-β)超家族，主要功能为负向调节骨骼肌的生长．肌肉生长抑制素基因敲除小鼠肌肉出现显著增加，而将干涉该基因的短发夹rna注射并电击转化入大鼠胫前肌则引起肌肉重量、肌纤维以及mhcⅱ表达的增加．通过与小鼠肌肉生长抑制素基因表达载体共转染hek293细胞，筛选到两条能够高效抑制小鼠肌肉生长抑制素基因表达的小干涉rna．构建了这两条小rna的表达载体mst-shrna1和mst-shrna2，用其分别转染小鼠c2c12成肌细胞，并通过g418药物筛选和流式细胞仪富集整合了短发夹rna表达载体的阳性细胞．通过采用real-timepcr和westernblot分析，检测到在分别整合了mst-shrna1和mst-shrna2的c2c12细胞中，内源性肌肉生长抑制素基因的mrna水平分别下降了10.2%和35.5%，蛋白质表达则分别下降了29.3%和64.7%．同时，在这两组中myod的表达上升了24.4%和40.4%，证明通过rna干涉实现的肌肉生长抑制素基因的抑制导致了下游myod基因表达的上调．这些结果表明内源性产生的肌肉生长抑制素基因小干涉rna能够有效抑制该基因的表达．这种以rna干涉技术为基础促进肌肉生长的方法为遗传育种提供了一种新技术，能够在对家畜经济性状的改良中发挥重要作用．