spr生物传感器研究缺乏3′→5′核酸外切酶活性的dna聚合酶对dna的分子识别功能

taq聚合酶(taqpol)、失去核酸酶结构域的鼠白血病逆转录酶(mmlvrt－)和人源的聚合酶β(polβ)缺少3′→5′外切核酸酶活性.利用表面等离子激元共振(spr)生物传感器，研究了taqpol与引物末端完全匹配和含有1、2、3个错配碱基的dna模板-引物(t-p)的结合动力学，并分析比较了在“正确”或“错误”dnmp环境中taqpol和引物末端完全匹配的dnat-p的结合.实验结果表明，随着引物末端错配碱基逐个增加，taqpol和dna的结合亲和力呈下降趋势，说明增强和引物末端完全匹配的dnat-p的亲和力是taqpol选择正确配对碱基的途径之一.在“错误”的dnmp环境中，taqpol与dnat-p的结合动力学能够用简单的1∶1langmuir模型进行拟合，但是mmlvrt－与dnat-p的结合动力学可能存在构象变化.而在“正确”的dnmp环境中，taqpol或mmlvrt－与dnat-p的结合符合构象变化模型，而且亲和力常数分别是无dnmp时的20倍和64倍，说明“正确”的dnmp诱导酶(taqpol或mmlvrt－)-dna复合物发生构象变化，大大增强了酶-dna复合物结合的紧密程度.在存在大量dnmp的环境中，polβ与dnat-p的结合动力学明显与缺乏dnmp时相异，polβ和dna的亲和力显著增强.