培养的大鼠海马神经元胞内ca2＋和no双标记方法研究

以培养8～10天的大鼠海马神经元为对象，选择calciumorangeam和daf-fmdiacetate为ca2＋和一氧化氮(no)的荧光指示剂，建立了基于激光扫描共聚焦显微技术的细胞内ca2＋和no双标记检测方法.此方法对ca2＋和no进行分步染色，然后应用激光扫描共聚焦显微镜(lscm)的双轨迹(twotrack)模式，通过快速切换激光实现对细胞内ca2＋和no的同时检测.实验结果显示，两种染料之间无串扰现象；在n-甲基-d-天冬氨酸(nmda)刺激下，海马神经元胞内ca2＋快速升高，随后达到平台期并有波动，no则稳定持续升高，这些变化过程与单标记的结果一致；双标记层切序列图像显示细胞内ca2＋和no都较集中分布于细胞中部，但在细节上两者的分布存在差异.此双标记方法能同时检测培养的海马神经元胞内ca2＋和no，为研究神经元胞内ca2＋和no的相互调控作用提供了一种新的手段.