人心肌肌钙蛋白i-c融合蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达及纯化

提取人心肌组织总rna，rt-pcr扩增出人心肌肌钙蛋白i（cardiactroponini，ctni）和肌钙蛋白c（tnc）基因，利用人工合成的可编码19个中性氨基酸残基为主的dna序列（linker），将ctni和tnc基因连接，插入到质粒pet15b中，将鉴定正确的重组pet15b质粒转化入大肠杆菌bl21(de3)plyss中，用异丙基-β-d–硫代半乳糖苷（iptg）诱导蛋白质表达.结果在大肠杆菌中成功实现了全长ctni-c融合蛋白（ctni-linker-tnc）的稳定可溶性高表达，在摇瓶中表达量可达21mg/l.利用目的蛋白n端的组氨酸“标签”（his-tag），经一步ni2+-sepharose柱亲和层析纯化，得到了聚丙烯酰胺凝胶电泳(page)纯蛋白质.经初步研究，ctni-c具有较好的免疫原性和稳定性，有望成为ctni测定系统可溯源的候选参考物质，推进ctni检测的标准化进程.