es细胞体外定向分化为成熟肝细胞的实验研究

探讨了肝细胞在胚胎干细胞（escell）体外诱导分化系统中成熟分化的条件、机制及其鉴定方法.利用tgf,bfgf、hgf等细胞生长因子进行balb/c小鼠es细胞向肝细胞方向的定向诱导.利用反转录聚合酶链反应（rt-pcr）、免疫细胞化学（icc）和放射免疫法（ria）动态检测肝细胞特异性基因和蛋白afp，alb，g6p，tat，ck8,ck18等在培养体系中的表达，并测定肝细胞的尿素合成功能，最后测定肝细胞分化率.结果，肝细胞特异基因afp，alb，g6p和tat最早分别于第3、9、11、13天表达，肝细胞特异蛋白afp，ck8，ck18和alb最早分别于第7、9、9和11天开始表达.第12天开始检测到尿素出现，浓度为8.3μmol/l,并随培养时间延长而浓度逐渐增加.最后，测得生长因子诱导组肝细胞的分化率为32％，对照组肝细胞分化率为8%.说明肝细胞可以在es细胞体外诱导分化系统中出现并成熟分化，bfgf、hgf、osm等可以明显提高细胞分化率和成熟度，有望成为解决肝功能替代疗法中细胞来源问题的新希望.