用pcr检测细胞培养中支原体污染

细胞培养中支原体污染已经成为严重的问题.为了扩增6种支原体(精氨酸支原体,口腔支原体,人型支原体,猪鼻支原体,发酵支原体及莱氏支原体)核糖体rna操纵子的16s和23sdna间区,设计了三个通用pcr引物(f1,f2及r1).当以6种支原体dna为模板时,引物f1和r1产生340到468bp的片段,引物f2和r1产生145到211bp的片段,当用hela细胞或e.colidna作为模板,用引物f1和r1时,在电泳中未观察到特定区带.此法最小能检出8.5fg精氨酸支原体dna,相当于13个精氨酸支原体.这说明,当这些支原体污染细胞培养时,能用pcr法检测出来.